关键词： 树脂吸附 胆酸 动物实验
ANIMAL EXPERIMENTAL STUDY ON EFFECT OF RESIN
ADSORPTION ON DECREASE OF CHOLIC ACID
Key words: Resin adsorption; Cholic acid; Animal experiment
高胆汁酸血症出现于多种肝脏疾病。几乎在所有肝胆疾病中，急性病变的胆汁酸异常率高达100%，慢性病变的肝胆疾病血清胆汁酸异常达92%。当胆酸迅速上升超过肾脏的排泄功能，病人就出现了高胆酸血症，及其伴随症状搔痒。胆汁酸含量过高对机体有极大的危害性，它不仅会引起机体一系列的中毒症状，而且由于血液中包括胆汁酸在内的多种代射毒性物质的积聚会进一步加剧肝脏损伤。对此常规治疗方法几乎无效［1］，为改善病人的生存质量，为可施行的肝脏移植做准备，促进肝衰竭的自发性恢复，改善肝功能，减轻肝脏损害并利其再生，血液灌流吸附清除这些中分子脂溶性物质是一种有效的治疗方法［2，3］。
针对国内血液净化清除血液中高胆汁酸的研究空白，结合国内外研究资料，本实验选用新型高效NK-111系列树脂，对黄疸动物模型血液中胆酸进行吸附，探讨对胆酸盐的吸附及血液相容性，为临床血液灌流治疗高胆汁酸血症提供了最直接的依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1 生理犬：体重14～16kg,雌雄不限。
2 NK-111系列树脂：南开大学分子生物学研究所提供，非离子型吸附树脂体外模拟液吸附胆酸90%以上者。
3 仪器设备：Beckman332高效液相仪，HITACH835氨基酸分析仪，Cobas Mira自动生化仪，NIP BP-1血泵，聚四氟乙烯灌流柱(自制)，动、静脉血液管路等。
1.2 方法
1 模型准备：采用分流型黄疸模型，动物手术前晚禁食不禁水。肌注氯胺酮0.2g，静脉给予适量异戊巴比妥及适量安定，总量不超30mg，术后24h，动物出现精神萎糜，尿色明显加深，术后48h，血液胆酸浓度明显上升。
2 树脂准备：取树脂100ml,以70%乙醇浸取过夜，去离子水冲洗后，生理盐水置换，装入自制的聚四氟乙烯吸附罐内，两端以60目滤网封装，加压确认无渗漏后，常规高压蒸汽灭菌待用。
3 血液灌流吸附实验：模型手术后观察，待出现黄疸症状，行血液灌流，肌注氯胺酮0.2g，采用股动、静脉插管形成灌流回路。生理盐水充分冲洗管路及吸附罐，肝素盐水预充盈管路，连接动、静脉插管，以100ml/min的速度进行血液灌流吸附，吸附60min，定时于动脉插管远端采血。通过前肢静脉60min补液300ml。全部实验组动物在整个吸附过程中未出现出血及管路凝血现象。
4 测试方法：胆酸分析采用Sep-PAK富集方法经HPLL分析［4］，标准品为Sigma公司产品；氨基酸分析采用HITACHI835型分析仪；Cobas Mira全自动生化分析仪分析肝功能；凝血酶原时间采用一步法药合，Sysemx F800血细胞计数仪分析全血细胞。
2 结果与讨论
2.1 灌流吸附前后血清中胆酸含量的变化
用HPLC方法分析检测血液中7种胆酸的含量：牛磺胆酸(TCA)，甘氨胆酸(GCA)，牛磺鹅脱氧胆酸(TCDCA)，牛磺脱氧胆酸(TDCA)，甘氨鹅脱氧胆酸(GCDCA)，甘氨脱氧胆酸(GDCA)，牛磺石胆酸(TLCA)。
表1 树脂吸附前后血中胆酸含量变化 (μmol/L, n=12)
时间015304560JC2.838±2.7501.469±1.0491.399±0.8251.243±1.1030.708±0.568GC6.337±6.2503.099±2.8292.647±2.3251.697±1.4191.412±1.422TCDC2.843±2.1302.560±2.1100.899±0.7541.803±1.0680.606±0.417TDC3.198±2.6412.322±2.5261.173±1.3220.704±0.5370.549±0.998GCDC4.825±2.2252.286±1.5301.527±1.1680.597±0.4970.32